熱線電話:010-56545250
  技術服務
服務專題
microRNA研究攻略
植物RNAi技術及服務
雙熒光素酶檢測【啟動子活性分析】
雙熒光素酶檢測【miRNA對靶基因調控研究】
 
您當前的位置:首頁 > 服務專題 > 植物RNAi技術及服務
植物RNAi技術及服務
   RNAi技術是研究基因功能的重要工具。其原理是對某個已知基因,設計誘導其沉默的dsRNA,通過合適手段導入細胞或機體使產生干涉效應的信號分子siRNA,導致基因表達水平下降或完全沉默。通過基因表型變化,鑒定該基因功能。
  1998年,Fire等[1]發現,過去利用正反義RNA阻斷基因表達都是因體外制備的單鏈RNA中污染極少量雙鏈RNA(dsRNA)所引起的,并發現在線蟲中導入dsRNA,mRNA明顯減少,推論存在某種機制特異地破壞降解內源mRNA,導致某個基因沉默,即轉錄后基因沉默(PTGS)。在此情況下,啟動子是活躍的但不能正常積累mRNA。這種現象被稱為RNA干涉(RNAi)。研究表明RNAi現象廣泛存在大多數真核生物中,起到自行監控細胞中異常的mRNA、封閉該基因表達、抵御病毒感染及阻斷轉座子的作用。
  最初在植物中研究RNAi的實驗是使水稻中報告基因GUS沉默,來比較正義鏈、反義鏈及dsRNA誘導RNAi效率的高低。近年來利用RNAi技術在水稻、擬南芥、蕓薹屬、油菜、煙草及棉花上,已經進行了一些基因功能驗證的相關研究[3]。
  研究表明,在植物體中,信號分子siRNA可通過植物的維管系統運輸。將目標基因特異性序列以正向和反方分別插入標記基因或內含子的5’端和3’端,再在一端連接一個啟動子,用轉基因技術將反式重復的外源基因導入生物體,誘導表達發夾結構的轉錄產物RNA(iphRNA),能產生穩定遺傳的RNAi現象[5],其誘導目的基因沉默效率高,適用性廣,應用潛力大。

dsRNA或iphRNA能通過以下主要兩種方法到植物:

農桿菌介導法。將帶有能轉錄成ihpRNA的反式重復的外源基因的T-DNA質粒,通過農桿菌介導整合到植物基因組上。
病毒誘導基因沉默(VIGS)。目標序列整合入病毒基因序列,通過農桿菌介導轉化ihpRNA表達。

pSGRNAi Vector---植物RNAi載體首選

信諾金達已經驗證的植物有:擬南芥、水稻、黃花菜、紅苕,玉米等。
根據目的基因來源,可選擇構建35S或Ubi啟動子的RNAi載體。

VIGS系統

病毒誘導的基因沉默(virus induced gene silencing,VIGS)是指攜帶目標基因片段的病毒侵染植物后,可誘導植物內源基因沉默、引起表型變化,進而根據表型變異研究目標基因的功能。VIGS是根據植物對RNA病毒防御機制發展起來的一種技術,其內在的分子基礎可能是轉錄后基因沉默(post-transcript gene silence)。因此,VIGS一經建立,即被視為研究植物基因功能的強有力工具,得到了深入的研究和廣泛應用,已用于煙草、番茄等植物的抗病反應、生長發育以及代謝調控的功能基因研究。

相應的pTRV1和pTRV2載體配套使用,用于植物RNAi。

植物RNAi載體構建的服務要求

目的基因序列或者登錄號;
需要的啟動子和篩選基因。

植物RNAi載體構建的基本流程

設計引物,
構建siRNA莖環結構;
根據要求,構建載體;
測序驗證。

植物RNAi載體構建的實驗報告內容

RNAi質粒及甘油菌株,測序報告和詳細實驗報告。

發送到info@sinogenesci.com或電話咨詢信諾金達技術部。

咨詢電話:010-56545250  QQ: 78001304

 

站點地圖 | 收藏本站 | 人才招聘 | 關于我們 | 聯系我們
地址:北京昌平區中關村生命科學園北清創意園1-222 電話:010-56545250 郵箱:info@sinogenesci.com 技術支持QQ:78001304 微信:xinnuojinda
© 2010-2019 北京信諾金達生物科技有限公司 版權所有 京ICP備10216372號 京公網安備11010802014978
沙巴体育